一、登革病毒介紹

登革熱是由登革病毒（dengue virus，DV）引起的一種急性傳染病，廣泛流行于全球熱帶及亞熱帶地區，多在城市和半城市地區，通常由蚊媒傳播。近幾十年全球登革熱發病率大幅度增長。根據WHO的官方數據，在2017-2018年病例數量下降之后，2019年病例數量急劇增加,其中來自我國的病例數報道也顯著增加。

登革病毒感染可表現為無癥狀隱性感染、非重癥感染及重癥感染等。典型的登革熱病程分為三期，即急性發熱期、極期和恢復期。

登革病毒屬黃病毒科黃病毒屬，為RNA病毒，基因組由單股正鏈RNA組成，共有4個血清型（DENV-1、DENV-2 DENV-3和DENV-4），4種血清型均可引起登革熱的感染和流行，其中2型傳播最廣泛， DENV的四種血清型在基因組序列上有65-70%的同源性，感染其中一型，將產生針對本血清型的保護。然而，研究表明，當再次感染異型DENV時，會增加發生重癥登革熱的風險。DENV與乙腦病毒和西尼羅病毒也有部分抗原相同。

二、登革病毒核酸檢測與登革熱的診斷

登革病毒感染的常用的實驗室檢測包括血常規、血生化檢查、病原學和血清學檢查等。其中登革病毒核酸檢測是登革熱病原學檢測的重要參考。早在2009年，WHO就將病毒分離、NS1抗原檢測和核酸檢測三種方法列為的登革病毒感染的早期檢測手段。在2017年，更是將登革病毒核酸檢測，列為對疑似急性感染期患者血清樣本檢測的首要推薦方法。我國《登革熱診療指南》中，明確：患者急性發熱期可應用登革病毒核酸檢測進行早期診斷。疑似或臨床診斷病例，急性期血清檢測出病毒核酸，可作為確診依據。我國衛生行業標準《登革熱診斷》，也將登革病毒RNA檢測列入登革熱病原學檢測方法，用于登革熱的早期診斷。

三、登革病毒核酸檢測試劑的上市批準情況

目前全球僅少數幾家公司生產的登革病毒核酸檢測試劑批準上市。在美國，美國疾控中心生產的CDC DENV-1-4 Real-Time RT-PCR Assay，已經FDA批準上市。另外，馬來西亞、新加坡等少數登革熱流行區域國家，也有相關檢測試劑批準上市。在我國，僅中山大學達安基因股份有限公司生產的“登革病毒核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）”和“登革病毒分型核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）”已批準上市。

四、審評思路

1. 預期用途的聲稱

與其他病原體檢測試劑相似，此類產品應明確檢測樣本類型（血清和/或血漿）、預期人群（如，曾前往登革熱流行區、有高熱等臨床表現的疑似人群）。同時，需要明確可檢出的登革病毒型別及是否可以進行分型檢測。

2. 分析性能評估

由于登革病毒核酸檢測主要用于急性期感染患者(<5天)的早期診斷，且登革病毒感染的及時診斷是應對登革熱疫情的重要手段之一，因此需采用對已知濃度（PFU/mL或TCID50/mL）登革病毒液進行系列梯度稀釋的方法，對此類檢測試劑的分析靈敏度進行準確的建立，并采用1～４型登革病毒亞型病毒株進行最低檢出限的驗證。

由于登革熱的流行病區分布，臨床表現等，與其他蟲媒疾病，如基孔肯雅熱、寨卡病毒病、黃熱病存在易混淆的情況。因此，臨床上需要進行與上述疾病的鑒別區分。對于登革病毒檢測試劑，應在特異性研究中，對黃熱病病毒、森林腦炎病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒、乙型肝炎病毒等進行交叉反應性研究，證明檢測試劑可特異檢出登革病毒的能力。對于登革病毒分型檢測試劑，還應對不同型別之間的特異性檢出能力進行額外的研究。

3. 臨床試驗

考慮到目前已上市同類檢測試劑較少，臨床試驗可以選擇與已上市產品或核酸序列測定方法進行比較研究。測序方法的性能驗證應至少包含對其最低檢出限的評價。

為保證臨床試驗包含一定數量的陽性樣本，臨床試驗應以發熱疑似登革熱患者作為研究對象，入組樣本注意與預期人群相一致。

五、結語

目前對登革熱/重癥登革熱沒有特異治療辦法，但及早發現和適宜的醫護可將死亡率降到1%以下。可以說，登革熱患者良好的臨床結局，很大程度上依賴于對登革熱疾病準確的早期診斷。作為登革病毒感染早期輔助診斷的主要手段之一，登革病毒核酸檢測應具備良好的特異性和靈敏度。產品的研發與驗證應充分合理，并注意在說明書中注明產品的主要性能、預期人群及使用局限性，以更好的指導臨床使用。