無聊的小編最近統(tǒng)計了一下《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》的高頻詞匯（數(shù)的準不準不重要，重點看條例精神），除了“醫(yī)療器械”這個絕對主角出現(xiàn)347次外，“應當”一詞出現(xiàn)了117次屈居第二（意思也很明白，眾企業(yè)聽令的意思）。

接下來重點來了，“有效”出現(xiàn)32次、“安全”出現(xiàn)29次，并且條例開篇第一條即點明了政府對于醫(yī)療器械產(chǎn)品（含IVD）的最重要的兩點要求——安全！有效！

“第一條?為了保證醫(yī)療器械的安全、有效，保障人體健康和生命安全，制定本條例。”

對于我們IVD產(chǎn)品而言，有效的產(chǎn)品本身就是在保護受試者的安全。因而，在IVD產(chǎn)品的研制、生產(chǎn)和使用過程，最重要的事情就是確保產(chǎn)品有效——穩(wěn)定、持續(xù)的有效。

在確保產(chǎn)品有效性的過程中，企業(yè)參考品擔任“標尺”的角色，好的企業(yè)參考品能夠準確衡量產(chǎn)品的性能，如同一把量程適中的標尺一樣。但是在現(xiàn)實操作過程中，卻未必都設置了符合要求的參考品。比如預期用途為糞便中病原菌抗原檢測的試劑，選擇純細菌培養(yǎng)物作為參考品，就有可能無法準確復現(xiàn)臨床應用過程中產(chǎn)品的最低檢出限。

本文針對定性產(chǎn)品，將企業(yè)參考品相關的內(nèi)容單獨摘出來，與大家分享一下，限于經(jīng)驗閱歷，不正之處歡迎交流與指正。

首先，原材料是產(chǎn)品質(zhì)量的基礎。對于原材料如何進行評價、如何確定質(zhì)量標準，每個企業(yè)都有自己的方法。實際操作過程中，多數(shù)企業(yè)均是使用企業(yè)內(nèi)部參考品作為評價標準。抗原、抗體、探針、酶等主要原材料除了進行純度、活性等方面的指標檢測外，最重要的是進行功能性試驗（功能性試驗通常將原材料組裝成試劑盒小樣，使用企業(yè)內(nèi)部參考品進行檢測）來篩選和評估原材料。

其次，對于生產(chǎn)工藝和反應體系的確定也主要依賴于企業(yè)內(nèi)部參考品。主要生產(chǎn)工藝包括引物探針、酶、抗原、抗體的濃度；包被時間；顯色系統(tǒng)濃度和用量等。主要反應體系包括被測樣本用量、試劑用量、反應的溫度、濕度、時間等。通過企業(yè)參考品評估比較不同的生產(chǎn)工藝和反應體系，最終確定最佳方案。

因而合理設置企業(yè)內(nèi)部參考品是非常重要的。如果參考品的設置不合理或者存在缺陷，那就會造成整個產(chǎn)品的原材料選擇、生產(chǎn)工藝的確定和反應體系的組成均存在較大的問題，導致產(chǎn)品的質(zhì)量不能達到臨床使用的安全性和有效性，容易在臨床檢測過程中出現(xiàn)錯誤結果而影響臨床的診斷和治療。

原則要求申請人應提供企業(yè)參考品的詳細制備過程，包括組成、來源、毒株特性（如名稱、型別、濃度）、溯源及定值資料等信息。本部分簡要介紹通常情況下至少需要包括的四種參考品。

1）陽性參考品

主要可反映產(chǎn)品檢測的靈敏度以及對不同型別被測物的檢出能力。

（1）應盡可能包括強陽性參考品、中等陽性參考品、弱陽性參考品。

（2）應盡可能包括臨床樣本中所有可能檢測到的型別及亞型。

（3）應使用金標準或適當?shù)姆椒ㄟM行確認，包括被檢測物的存在以及濃度。

如原則規(guī)定“陽性參考品應包含DENV-1、DENV-2 DENV-3和DENV-4型標準毒株或臨床分離株”

2）陰性參考品

為不含被測物的陰性樣本，主要用途是反映產(chǎn)品檢測的特異性。

（1）?高值陰性參考品，可以驗證產(chǎn)品檢測的穩(wěn)定性并可進一步驗證產(chǎn)品Cut Off值的設定是否合理。

（2）?含有可能會產(chǎn)生交叉反應物質(zhì)的樣本（可能與被測物同源性的病原微生物、抗體等，對于微生物檢測還應具有采樣部位正常可能寄生的微生物，以及引起相似臨床癥狀的病原微生物），對反映產(chǎn)品檢測的特異性十分重要。

（3）?治療藥物干擾的樣本，包括對于該檢測項目可能的治療藥物及含有常規(guī)治療藥物濃度的樣本。

（4）?應使用金標準或適當?shù)姆椒ㄟM行確認，確認該檢測物為陰性。

如原則規(guī)定“陰性參考品則主要涉及對分析特異性（交叉反應）的驗證情況”

3）最低檢測限參考品

評價定性產(chǎn)品檢測下限的依據(jù)，是評價產(chǎn)品檢測能力的重要工具。

（1）如被測物包括多個型別和亞型，至少選擇三個主要型別或亞型進行設置。

（2）最低檢出限是評價產(chǎn)品批間一致性的重要指標。因此，必須對最低檢出限參考品進行被測物的定量或半定量，確保其自身的批間一致方能發(fā)揮作用。

（3）可以采用藥監(jiān)局已經(jīng)批準上市的產(chǎn)品、質(zhì)量較好的同類定量試劑對參考品進行定值。如該檢測項目存在國家或國際的定量標準品，則應對該參考品進行量值的溯源。如該檢測項目沒有定量檢測試劑可以進行參考，則可以采用其它方法或金標準的方法對參考品進行定量或半定量。

4）精密度參考品

可反映產(chǎn)品檢測的重復性以及重復檢測的穩(wěn)定性

（1）?應是包括被測物的主要型別不同濃度的樣本。

（2）?檢測次數(shù)一般10次左右，次數(shù)過多或過少均無法客觀反映產(chǎn)品檢測的重復性。

如原則規(guī)定“精密度參考品應至少包含兩個濃度水平，其中包含弱陽性水平。”

基質(zhì)效應

正如軍事訓練的原則“仗怎么打，兵就怎么練”一樣，企業(yè)參考品應盡可能與臨床檢測的樣本一致，如此才能客觀準確反映試劑的有效性。

參考品的基質(zhì)應與臨床被檢樣本相同，如完全相同基質(zhì)的樣本不易獲得，應采用盡可能與臨床被檢樣本基質(zhì)接近的樣本，并對樣本的基質(zhì)效應進行詳細的研究。

《YY/T 1652-2019 體外診斷試劑用質(zhì)控物通用技術要求》中對“基質(zhì)效應”有如下講述：

理想狀態(tài)下，質(zhì)控物的成分應盡可能的接近人樣本的成分，從而最小化基質(zhì)帶來的影響，正確反映樣本的檢測值。

在實際研制中，為了減少消耗，更加方便和安全，會對基質(zhì)進行一些改變。例如，動物或合成的基質(zhì)被用來保護實驗人員不受感染病原體的侵害；防腐劑，穩(wěn)定劑，抗菌劑和澄清劑也會被加入來增加質(zhì)控物的易用性和穩(wěn)定性；生產(chǎn)過程（例如，凍干或滅活）能夠顯著改變質(zhì)控物的物理，化學和生物特性。盡管各種基質(zhì)和添加劑有益處，但是這些與人樣本的差異可能會導致質(zhì)控物不能完全反映人樣本的檢測性能。因此，建議制造商在研究過程中對質(zhì)控物的基質(zhì)進行評價，在質(zhì)控物基質(zhì)和人樣本中平行加入能覆蓋測量范圍的被測物，比較這些結果來確定質(zhì)控物基質(zhì)相對于天然樣本的偏差、精密度差異和穩(wěn)定性差異等。必要時可參考CLSI指南EP-14、EP-30進行基質(zhì)效應評估。

參考物質(zhì)的來源

（1）WHO是世界上體外生物診斷試劑參考物質(zhì)的主要提供商，長期致力于高品質(zhì)的國際參考物質(zhì)的研發(fā)工作，為各國提高體外診斷檢測體系的準確性和可靠性提供支持。在其已經(jīng)發(fā)布和正在研制的參考物質(zhì)中，大約95％由英國國家生物制品檢定所（The National Institute for Biological Standards and Control，NIBSC）提供。

（2）在我國，國家藥品、醫(yī)療器械（包括體外診斷試劑）等標準物質(zhì)的研究、方法和管理工作由中國食品藥品檢定研究院（簡稱：中檢院）負責。目前查詢?nèi)肟跒?/aoc.nifdc.org.cn/sell/home/search.html。

（3）如果沒有國際和國內(nèi)同類別的參考物質(zhì)提供，那就需要充分發(fā)揮大家的聰明才智，結合上述的主要原則進行設置。在制備過程中可以借鑒中檢院的思路，比如《人類白細胞抗原B27 核酸檢測國家參考品的建立》一文講述的國家參考品的建立過程。

文章中對樣本來源如何描述（志愿者！）、如何進行定制、如何進行穩(wěn)定性研究等都講得很清楚。

文章摘錄

董勁春老師在《定性檢測用體外診斷試劑的企業(yè)內(nèi)部參考品的設置》中提到：

（1）陽性參考品的制備可將強陽性參考品使用健康人的陰性血清進行系列稀釋得到不同稀釋度的陽性樣本，該稀釋用陰性血清不能對產(chǎn)品檢測產(chǎn)生不利的影響。同時還應在臨床樣本中選擇不同陽性強度的樣本直接作為參考品。

（2）選擇不同型別的強陽性樣本作為基礎樣本，使用健康人的陰性血清對強陽性樣本進行倍比稀釋得到一系列稀釋度的樣本，該稀釋過程必須保證樣本的基質(zhì)保持不變。使用待評價產(chǎn)品對不同稀釋度的參考品進行檢測，每個稀釋度參考品至少檢測三次，直至檢測為陰性結果為止。檢測為陽性的最高稀釋度參考品為最低檢出限參考品。

（3）在技術審評過程中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有些申報企業(yè)在設置該參考品時只是選擇一個臨床的強陽性樣本，然后進行倍比稀釋，對系列稀釋的參考品進行檢測，直至檢測到結果為陰性的參考品，并將上一個稀釋度參考品設置為最低檢出限的評價標準，或?qū)⒃搮⒖计返南♂尪仍O定為評價標準。但是其并不能清楚的確定參考品中的被測物的具體濃度。因此，這種設置并不能有效的評價產(chǎn)品的最低檢出限，也不能使不同批次的參考品保持一致性。所以應采用可能的方法對該參考品進行被測物的定量或半定量，以期給出最低檢出限參考品中的被測物的具體量值。

參考文獻：

【1】?定性檢測用體外診斷試劑的企業(yè)內(nèi)部參考品的設置

【2】?體外生物診斷試劑參考物質(zhì)的現(xiàn)狀與發(fā)展

【3】?人類白細胞抗原B27核酸檢測國家參考品的建立

【4】?YY/T 1652-2019體外診斷試劑用質(zhì)控物通用技術要求

【5】?登革病毒核酸檢測試劑注冊技術審查指導原則

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